色譜分析的重要作用之一是對樣品進(jìn)行定量，而色譜法定量的依據(jù)是組分的重量或在載氣中的濃度與檢測器的響應(yīng)信號成正比。常見定量分析方法有面積歸一化法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法。大家容易傻傻分不清楚的莫過于內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法了，下面我們從定義、特點等方面剖析一下它們的異同和優(yōu)點。
1.定義
內(nèi)標(biāo)法是一種間接或相對的校準(zhǔn)方法。在分析測定樣品中某組分含量時，選一與欲測組分相近但能分離的組分做內(nèi)標(biāo)物（內(nèi)標(biāo)物是樣品中沒有的組分），然后配制欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣得相對校正因子。再將內(nèi)標(biāo)物加入欲測組分的樣品中，進(jìn)樣后測得欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的定量參數(shù)。
2.內(nèi)標(biāo)物
內(nèi)標(biāo)法在氣相色譜定量分析中是一種重要的技術(shù)。使用內(nèi)標(biāo)法時，在樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，它可被色譜柱所分離，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測定內(nèi)標(biāo)物和待測組分的峰面積與相對響應(yīng)值，即可求出待測組分在樣品中的百分含量。采用內(nèi)標(biāo)法定量時，內(nèi)標(biāo)物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)是一個能得到純樣的己知化合物，這樣它能以準(zhǔn)確、已知的量加到樣品中去，它應(yīng)當(dāng)和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)（如化學(xué)結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等）、色譜行為和響應(yīng)特征，最好是被分析物質(zhì)的一個同系物。當(dāng)然，在色譜分析條什下，內(nèi)標(biāo)物必須能與樣品中各組分充分分離。
3.選擇內(nèi)標(biāo)物的四個要求
（1）內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì)；
（2）它必須溶于試樣中，并與試樣中各組分的色譜峰才能分離；
（3）加入內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測組分；
（4）色譜峰的位置應(yīng)與被測組分的色譜峰的位置相近，或在幾個被測組分色譜峰中間。
4.影響因素
在使用內(nèi)標(biāo)法定量時，影響內(nèi)標(biāo)和被測組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學(xué)方面的、色譜方面的和儀器方面的三類。由化學(xué)方面的原因產(chǎn)生的面積比的變化常常在分析重復(fù)樣品時出現(xiàn)。
化學(xué)方面的因素
（1）內(nèi)標(biāo)物在樣品里混合不好；
（2）內(nèi)標(biāo)物和樣品組分之間發(fā)生反應(yīng)；
（3）內(nèi)標(biāo)物純度可變等。
對于一個比較成熟的方法來說，色譜方面的問題發(fā)生的可能性更大一些，色譜上常見的一些問題（如滲漏）對絕對面積的影響比較大，對面積比的影響則要小一些。
但如果絕對面積的變化已大到足以使面積比發(fā)生顯著變化的程度，那么一定有某個重要的色譜問題存在，比如進(jìn)樣量改變太大，樣品組分濃度和內(nèi)標(biāo)濃度之間有很大的差別，檢測器非線性等。進(jìn)樣量應(yīng)足夠小并保持不變，這樣才不致于造成檢測器和積分裝置飽和。
如果認(rèn)為方法比較可靠，而色譜圖看來也是正常的話，應(yīng)著重檢查積分裝置和設(shè)置、斜率和峰寬定位。對積分裝置發(fā)生懷疑的最有力的證據(jù)是：面積比可變，而峰高比保持相對恒定。
5.優(yōu)點
內(nèi)標(biāo)法是結(jié)合了峰面積歸一法和外標(biāo)法的優(yōu)點的一種方法，它在加入內(nèi)標(biāo)物后，按峰面積歸一法的分析方法進(jìn)行分析，這就避免了由于進(jìn)樣的一致性及樣品基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的偶然誤差。因而，它的分析精密度也是比較高的，是一種比較理想的定量分析方法。進(jìn)樣量的變化、色譜操作條件的微小變化對定量結(jié)果的影響不大，特別是在樣品前處理（如濃縮、萃取、衍生化等）前加入內(nèi)標(biāo)物，可部分補償欲測組分在樣品前處理時的損失。若要獲得很高的精密度的結(jié)果時，可以加入樹種內(nèi)標(biāo)物，以提高定量分析的精度。缺點：每次測定都需要用分析天平準(zhǔn)確稱取內(nèi)標(biāo)物和樣品的質(zhì)量，故費時麻煩。同時必須要有合適的標(biāo)樣及內(nèi)標(biāo)物才能進(jìn)行內(nèi)標(biāo)法定量分析。
1.定義
與內(nèi)標(biāo)法相比，外標(biāo)法不是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測樣品中，而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨測定，把得到的色譜峰面積與被測組分的色譜峰面積進(jìn)行比較求得被測組分的含量。外標(biāo)物與被測組分同為一種物質(zhì)但要求它有一定的純度，分析時外標(biāo)物的濃度應(yīng)與被測物濃度相接近，以利于定量分析的準(zhǔn)確性。
2.種類
外標(biāo)法分為工作曲線法、外標(biāo)一點法。工作曲線法是用對照物質(zhì)配制一系列濃度的對照品溶液確定工作曲線，求出斜率、截距。在相同的條件下，準(zhǔn)確進(jìn)樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液，根據(jù)待測組分的信號，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度，或用回歸方程計算。
3.適用范圍
外標(biāo)法適用于常規(guī)分析，它用于衡量組分的分析也能得到滿意的結(jié)果。這個方法的精確度，在很大程度上取決于操作條件的控制。樣品分析的操作條件，必須嚴(yán)格控制于繪制校正曲線時的條件。當(dāng)峰高對操作條件的敏感性以及對拖尾峰、柱子超負(fù)荷和檢測器有大的響應(yīng)時，給出非線性的校正曲線，此時峰面積計算常常可以得到更好的結(jié)果。不過，對重疊峰，難以準(zhǔn)確的測量峰面積，必須提高分離度才能達(dá)到預(yù)期的效果。
4.特點
外標(biāo)法誤差的來源，除了分離條件的變化之外，就是進(jìn)樣的重復(fù)性。使用注射器進(jìn)樣，外標(biāo)法的誤差大約在0.5%以內(nèi)。但是，使用定量進(jìn)樣閥可獲得1%的精密度；若同時小心控制分離參數(shù)，分析精密度可達(dá)±0.25%。
外標(biāo)要求儀器重復(fù)性很嚴(yán)格，適于大量的分析樣品，因為儀器隨著使用會有所變化，因此需要定期進(jìn)行曲線校正。此法的特點是操作簡單，計算方便，不需測量校正因子，適于自動分析。但儀器的重現(xiàn)性和操作條件的穩(wěn)定性必須保證，否則，會影響實驗結(jié)果。
內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點是測定的結(jié)果較為準(zhǔn)確，由于通過測量內(nèi)標(biāo)物及被測組分的峰面積的相對值來進(jìn)行計算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。內(nèi)標(biāo)法的缺點是操作程序較為麻煩，每次分析時內(nèi)標(biāo)物和試樣都要準(zhǔn)確稱量，有時尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也有困難。
外標(biāo)法就是用標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積或峰高與其對應(yīng)的濃度做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，測出樣品的峰面積或峰高，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其對應(yīng)的濃度，這是常用的一種定量方法，外標(biāo)法簡便，但進(jìn)樣量要求十分準(zhǔn)確，要嚴(yán)格控制在與標(biāo)準(zhǔn)物相同的操作條件下進(jìn)行，否則造成分析誤差，得不到準(zhǔn)確的測量結(jié)果。
內(nèi)標(biāo)法是對應(yīng)外表法說的，外標(biāo)法需要用樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對比，但是有時我們很難保證樣品和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)的體積是一樣的，畢竟要有誤差，這時候就用內(nèi)標(biāo)法，就是在外標(biāo)法的基礎(chǔ)上，在樣品和標(biāo)準(zhǔn)品里在加入一種物質(zhì)，通過加入物質(zhì)的峰面積或峰高的變化，就可以看出我們標(biāo)準(zhǔn)品和樣品進(jìn)樣體積的差別，但同時會引進(jìn)加入物質(zhì)的秤量誤差。所以一般用外標(biāo)法來定量，如果進(jìn)樣體積很難掌握，就用內(nèi)標(biāo)法，可以消除進(jìn)樣體積的誤差。
內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都是定量的一種方法而已，至于哪一種方法好與不好不能一概而論，做不同的分析，面對著不同的要求，再加上分析成本分析效率等等問題，簡單而有效進(jìn)行定量分析來滿足要求才是最重要的。
應(yīng)用外標(biāo)法能夠滿足要求，第一選擇還是外標(biāo)法了，畢竟簡單而省事。對于精密度要求比較高、結(jié)果準(zhǔn)確度會產(chǎn)生重大影響、實驗室條件不是很理想的等等條件下，用內(nèi)標(biāo)法還是必要的。無論應(yīng)用那種方法，方法的驗證和確認(rèn)都是很重要的，只要是按照程序經(jīng)過驗證和確認(rèn)的方法，都有其應(yīng)用的空間的。
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